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中國CDC使用Geneious Prime是怎么鑒定出來2019-nCoV新型冠狀病毒和發(fā)現(xiàn)進(jìn)化的?

Geneious Prime作為關(guān)鍵性工具對新型冠狀病毒基因組分析、自動(dòng)注釋、查看 和操縱病毒進(jìn)化系統(tǒng)發(fā)育樹

? ? ? ? 細(xì)胞培養(yǎng)中的病毒分離,基于免疫熒光的測定法和確定核酸的分子技術(shù)已成功用于檢測和鑒定病毒。另一方面,最常用的病毒定量方法可分為三大類:測量病毒感染性的技術(shù)(病毒噬斑測定,TCID50和免疫熒光病灶分析),檢查病毒核酸和蛋白質(zhì)(qPCR,免疫印跡,免疫沉淀,ELISA和血細(xì)胞凝集分析)的試劑,以及直接計(jì)數(shù)物理病毒顆粒的試劑(病毒流式細(xì)胞儀和透射電子顯微鏡)。由于這些已建立的獨(dú)立方法都有一些局限性(表1)。
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? ? ? 在這里,我們羅列了一些最常見的病毒鑒定和定量方案,目前在實(shí)驗(yàn)和診斷病毒學(xué)中普遍使用它們。基于后來改進(jìn)的病毒鑒定和定量技術(shù),如質(zhì)譜法和下一代測序/宏基因組學(xué)(mNGS),人們進(jìn)行了探索,從而以克服它們的局限性。而此次2019-nCoV新型冠狀病毒的發(fā)現(xiàn)mNGS技術(shù)就扮演了相當(dāng)重要的"先知"角色,更使得技術(shù)人員在第一時(shí)間警覺不會(huì)束手無策,并從而奠定后續(xù)快速鑒定、診斷之路。親歷人員回顧性總結(jié)發(fā)出“今夜再次被證實(shí),mNGS技術(shù)將被推向神壇”的預(yù)言。

? ? 我們基于中國CDC發(fā)表在《柳葉刀》的重要文獻(xiàn)梳理了基于mNGS技術(shù)鑒定2019-nCoV新型冠狀病毒的技術(shù)路線、對下游RT-PCR試劑開發(fā)的支持、以及病毒進(jìn)化分析的前世今生的方法進(jìn)行了歸納。參考下圖(如看不清此圖請掃碼免費(fèi)共享高清大圖)。

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鑒定2019-nCoV新型冠狀病毒通用技術(shù)路線和病毒差異化分析概要

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從病毒數(shù)據(jù)樣本獲得、數(shù)據(jù)前處理、映射到參考、Blast搜索、Zika病毒變異性內(nèi)的系統(tǒng)發(fā)育分析等流程進(jìn)行細(xì)致的演示,期望此種技術(shù)的廣泛傳播成為各種實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)能力進(jìn)而識別新型病毒和變異,提供預(yù)防和診治的手段,造福人類。

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